VIRA-PORE空氣病毒采樣盒

空氣采樣盒，用於(yu) 收集病毒顆粒

具有ZePore™過濾器的Vira-Pore病毒采樣盒經過專(zhuan) 門設計和驗證，可用於(yu) 收集空氣傳(chuan) 播中的冠狀病毒，並且它可用於(yu) 采樣其他類似的病毒。

目標

為(wei) 了確定冠狀病毒空氣采樣的合適參數，本驗證采用直徑37mm孔徑1 µm的PTFE層壓“ ZePore” 空氣病毒過濾器對冠狀病毒的替代物--人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）進行空氣采樣。 人冠狀病毒OC43和COVID病毒均為(wei) 正向單鏈RNA（+ ssRNA）β包裹的冠狀病毒，因此OC43是合適的COVID病毒模擬物。 通常以往在過濾器上進行病毒采樣的研究沒有包括基本的驗證數據，例如確定從(cong) 過濾器上洗脫病毒的合適技術，在采樣過程中或在運輸及存儲(chu) 過程中病毒在過濾器上的穩定性等數據。

方法

標準化病毒空氣采樣的持續時間，提取洗脫的病毒RNA，然後用超微量核酸蛋白分析儀(yi) 進行RNA定量（ng / µL為(wei) 單位），采用熒光定量PCR儀(yi) 對現場樣品進行測試，所有實驗均重複三次（除非另有說明）。實驗結果采用病毒相對回收質量（relative recovery）來表示。病毒相對回收質量（RRmass）是從(cong) 過濾器洗脫的病毒質量濃度（ng / ml）相對於(yu) 初始霧化器懸浮液中病毒質量濃度（ng / ml）的比率。過濾器安裝在“開口式”的37mm三層導電聚丙烯盒中。導電盒優(you) 選用於(yu) 空氣微粒采樣，以防止靜電吸附到盒壁。空氣流量初步設置為(wei) 10 L / min，方便在短時間內(nei) 較大程度地收集病毒。帶有過濾器和支撐墊的壓降為(wei) 17英寸水壓，與(yu) 某些個(ge) 人采樣泵（例如Gilian 12或GSA SG10或SG10-2）兼容。空氣樣品以10 L / min的流量進行病毒顆粒空氣采樣10分鍾，同時另一個(ge) 樣品采用對過濾器加標病毒顆粒懸浮液，兩(liang) 個(ge) 樣品均使用兩(liang) 種不同的方法對病毒RNA進行洗脫。兩(liang) 種情況下回收率均較高的洗脫方法都是將濾膜向內(nei) 卷起來，然後將其放入裝有1 mL MTM培養(yang) 基（Longhorn Vaccines and Diagnostics™，Inc。）的2 mL微量離心管中，並渦旋三次，每次渦旋10秒。霧化病毒懸浮液是使用Collison霧化器在II級生物安全櫃中產(chan) 生的。此過程產(chan) 生的平均空氣傳(chuan) 播顆粒濃度為(wei) ～1 x 10^8/ L。進行空氣采樣，采樣10分鍾，60分鍾後，立即將濾膜中的病毒洗脫下來， 或采樣10分鍾將其暴露在清潔的氣流中60分鍾再洗脫病毒。 

結果

對於(yu) 采樣10分鍾的樣品，RNA質量濃度和RRmass（圖1中的紫色條）分別為(wei) 2.0 x 10^6 ng / mL（±1.06 x 10^6）和0.55（±0.18）。對於(yu) 采樣60分鍾的樣品，平均RNA質量濃度為(wei) 5.98 x 10^6 ng / mL（±1.79 x 10^6），調整采樣時間後的RRmass（圖1中的藍色條）為(wei) 0.32（±0.10）。在采樣10分鍾的樣品中，然後將其暴露在清潔的氣流中60分鍾，RNA質量濃度和RRmass（圖1中的橙色條）分別為(wei) 2.17 x 10^6 ng / mL（±6.97 x 105）和0.50（±0.16）。這些結果表明，在分別采樣10分鍾，60分鍾和10分鍾，然後暴露於(yu) 清潔氣流60分鍾後，霧化病毒的回收率是相似的，差異無統計學意義(yi) （p = 0.31）。在另一個(ge) 實驗中，空氣樣本分別在4°C和25°C下存儲(chu) 7天。在4°C下，RNA質量濃度為(wei) 4.41 x 106 ng / mL（±2.51 x 10^6），在25°C下存儲(chu) 時為(wei) 1.34 x 10^6 ng / mL（±8.23 x 105）。因此，房間存放條件下的平均濃度比冰箱存放條件下的平均濃度低3.3倍。由於(yu) 實驗的可變性，差異沒有顯著差異（p = 0.11）。如圖1所示，4°C存儲(chu) （綠色條）和25°C存儲(chu) （黃色條）的RRmass分別為(wei) 0.55（±0.31）和0.17（±0.10）。通過qRT-PCR進一步分析了上述每組實驗中的一個(ge) 洗脫樣品，以顯示總RNA分析方法未產(chan) 生誤導性結果。 對於(yu) 這兩(liang) 個(ge) 樣品，檢測到的RNA濃度相似：每毫升4.01 x 10^6 RNA拷貝（用於(yu) 4°C儲(chu) 存）和每毫升4.18 x 10^6 RNA拷貝（用於(yu) 25°C儲(chu) 存）。對於(yu) 這兩(liang) 個(ge) 樣品，qRT-PCR的CT值均高於(yu) 30，是接近檢測下限的Ct值。 這可以解釋兩(liang) 個(ge) 微量樣品之間值的相似性，以及為(wei) 什麽(me) 與(yu) 總RNA分析不同，兩(liang) 個(ge) 樣品之間的差異不明顯。 在進行進一步工作之前，建議在分析之前將樣品冷藏保存。

結論

•COVID病毒的替代物人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）被成功霧化，收集並回收用於(yu) 分析。

•與(yu) 搖床方法相比，渦旋洗脫產(chan) 生更高的RNA濃度。

•在三種不同的采樣場景（10分鍾，60分鍾和10分鍾後暴露於(yu) 60分鍾的清潔氣流）後，從(cong) 過濾器中回收霧化病毒的差異沒有顯著差異。

•比較在4°C和25°C儲(chu) 存後病毒的回收率，與(yu) 在25°C儲(chu) 存後相比，病毒在4°C儲(chu) 存後的回收率高約3倍； 但是，由於(yu) 實驗的可變性，差異沒有統計學意義(yi) 。

注意：VIRA-PORE病毒采樣盒已經過測試可從(cong) COVID替代病毒中回收RNA病毒，但尚未測試過從(cong) COVID病毒中收集RNA病毒。 請參閱技術摘要說明的測試方法和測試結果。 客戶應自己負責遵守（i）產(chan) 品使用說明和（ii）收集空氣傳(chuan) 播的病毒後，與(yu) 產(chan) 品的使用和安全處理以及包裝，標簽和運輸有關(guan) 的所有適用的政府法律，規則，法規和行業(ye) 標準。生產(chan) 商建議您在進行任何空氣采樣之前，先向具有病毒專(zhuan) 業(ye) 知識的合格環境微生物實驗室尋求指導。 尋求指導，安全的處理和運輸程序，因為(wei) COVID病毒是高度傳(chuan) 染性的病原體(ti) ，如果暴露則具有重大健康隱患。