在野生動物的研究中，應用基因組學技術的主要困難之一是常規采集微量或非創傷(shang) 性樣本，這些樣本通常會(hui) 發生降解片段化、含量極低或有環境或食糜的外源 DNA 汙染的情況發生。在野生動物采樣場景中，糞樣是相對較容易采集的，特別適合避免在接觸動物有危險性的情況下進行采樣。以往，由於(yu) 缺乏靈活且經濟的技術手段，使得對糞便樣本的基因組分析受到限製。

在過去的幾十年裏，微衛星（SSR）分析是野生動物遺傳(chuan) 學基因分型的傳(chuan) 統技術。雖然微衛星分析仍被廣泛使用，但微衛星分析正迅速被單核苷酸多態性 (SNP) 分析所取代，因為(wei) 單核苷酸多態性 (SNP) 在整個(ge) 基因組中更為(wei) 豐(feng) 富，並且更適合於(yu) 自動化的高通量基因分型。高通量的SNP組已通過基因芯片的方式廣泛用於(yu) 人類和農(nong) 業(ye) 物種的研究。 然而，高通量 SNP 基因芯片的高昂開發成本限製了它們(men) 在野生動物研究中的使用，僅(jin) 限於(yu) 少數物種。 SNP 基因芯片也不適用於(yu) 微量樣本，因為(wei) 它們(men) 通常需要大量 DNA。

高通量測序基因分型 (GBS) 技術規避了基因芯片開發成本高的問題，但酶切位點序列的隨機分布阻止了靶向測序特定位點，而且大多數高通量測序基因分型 (GBS)技術還需要模板 DNA的起始量高於(yu) 實際的微量樣本，例如糞便樣本。

隨著基因芯片和 GBS高通量測序技術的發展，高通量靶向SNP組測序方法已成為(wei) 從(cong) 全基因組序列中獲得基因型數據的可行替代方案。 高通量靶向SNP組測序可大致分為(wei) 1）探針序列捕獲方法，其中探針被設計為(wei) 捕獲 DNA 的誘餌，或2）通過 PCR 方法，其中探針被設計用於(yu) 目標序列擴增。 高通量靶向SNP組測序實現了微量DNA模板的目標SNP位點的高覆蓋率和低測序成本。 因此， 高通量靶向SNP組測序有望將野生動物遺傳(chuan) 學領域引入基因組學研究。

最近，一種Allegro的新型高通量SNP組靶向測序試劑已顯示出成本低、測序數據質量高和通量高的基因分型優(you) 勢。 該試劑通過單引物富集技術 (SPET)，可以在單個(ge) 反應中進行1k – 100k + 目標位點的多重目標序列的富集，推薦的最小 DNA起始量為(wei) 10ng。 單引物擴增減少了引物二聚體(ti) 的出現，對SNP靶位點的高特異性進一步提高了實驗之間的可重複性。 與(yu) 基因芯片相比，這種方法很靈活，允許對相對少量的樣本（目前為(wei) 192 個(ge) 的試劑包裝）進行快速定製分析設計。單引物富集技術 (SPET)起初用於(yu) 人類醫學，然後用於(yu) 植物遺傳(chuan) 學，包括黑楊和玉米、番茄和茄子、棕櫚油和加那利群島的瀕危植物，但它在野生動物中的使用仍然有限。

在大型哺乳動物中，糞便通常是最容易獲得的用於(yu) 基因分型的樣本組織。 值得注意的是，馬科動物的糞便中積累大量上皮細胞沉積物，從(cong) 而使得從(cong) 黏膜表麵采樣宿主DNA提供了可能。 

日前，加拿大科學家報道了使用Allegro高通量SNP組靶向測序試劑從(cong) 野馬糞便拭子中分離的DNA生成全基因組 SNP 數據的研究。作為(wei) 加拿大某省野馬長期研究的一部分，分別使用 dsDNA 熒光和宿主特異性 qPCR 測定法對收集的 989 份樣品的總DNA和宿主特異性 DNA進行了定量。使用針對 279個(ge) SNP的定製SNP組探針對代表 44個(ge) 個(ge) 體(ti) 的 48個(ge) 樣本進行了基因分型，這些樣本至少含有 10ng 的宿主 DNA。通過將 Allegro高通量SNP組靶向測序基因型與(yu) 從(cong) 具有SNP基因芯片的相同個(ge) 體(ti) 和來自同一匹馬的多個(ge) 樣本中獲得的基因型進行對比，分別評估了基因分型的準確性和一致性。 62% 的拭子產(chan) 生了可用於(yu) Allegro高通量SNP組靶向測序技術的起始宿主DNA 量。忽略未能擴增的樣本，Allegro高通量SNP組靶向測序試劑對每個(ge) 樣本平均恢複了 86.7% 的目標SNP位點，而Allegro高通量SNP組靶向測序技術和 基因芯片之間的基因型一致性為(wei) 98.5%。來自同一個(ge) 體(ti) 的基因型的重複性接近統一，平均為(wei) 99.9%。該研究表明Allegro高通量SNP組靶向測序試劑適用於(yu) 全基因組、微量DNA樣本的靶向 SNP 基因分型，並將促進馬科動物和相關(guan) 物種的進一步生態和保護遺傳(chuan) 學研究。