Femto-Sensitive ECL Solution是一種基於(yu) Luminol的高靈敏性、非放射性化學發光底物,用於(yu) 檢測免疫印跡中固定在膜上的辣根過氧化物酶(HRP),可檢測飛克級別的抗原。持續發光時間長達6個(ge) 小時,可反複曝光於(yu) X射線膠片或化學發光成像係統,以獲得最佳的結果或剝離的免疫檢測試劑和再探測。
Femto-Sensitive ECL Solution可用於(yu) Western Blot,Northern Blot, Southern Blot, Dot Blot等實驗中檢測HRP標記的探針或者抗體(ti) 。
Preparation使用說明:
1. 常規電泳、轉膜、HRP標記抗體(ti) 或核酸探針孵育、洗膜。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親(qin) 和素-生物素-HRP夾法。核酸雜交膜用HRP標記探針雜交,洗膜。
2. 洗滌膜上的 HRP 標記二抗時,新鮮配製發光工作液:分別取等體(ti) 積的溶液Luminol/Enhancer solution 和 Stable Peroxide Buffer 1:1混合,放置使之升到室溫否則會(hui) 減弱熒光強度。建議立即使用工作液,室溫放置數小時後仍可使用但靈敏度略有降低。
3. 用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝幹洗液但勿使膜*幹燥。將膜*浸入並與(yu) 發光工作液(0.125ml發光工作液/cm膜)充分接觸。室溫孵育 3-5分鍾,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會(hui) 增加靈敏度,有時還會(hui) 導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應,使用過少的發光工作液不利反應進行,也會(hui) 導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為(wei) 達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。
4. 用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝幹發光工作液。
5. 在 X 光膠片暗盒內(nei) 麵鋪一張麵積大於(yu) 膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來*包裹雜交膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多餘(yu) 的保鮮膜。用濾紙吸去多餘(yu) 的發光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nei) ,最好蛋白帶麵向上。
6. 在黑暗中放入X光膠片,分別曝光不同的時間如數秒到數分鍾顯影衝(chong) 洗。
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