I-Blue 中量質粒提取試劑盒(無內(nei) 毒素)使用預裝的陰離子交換樹脂柱從(cong) 50-150 ml培養(yang) 的細菌中純化質粒DNA。試劑盒中包含I-Blue裂解緩衝(chong) 液 Lysis Buffer(可選的顏色指示),以防止常見的操作錯誤,從(cong) 而確保有效的細胞裂解和SDS沉澱。在重新懸浮步驟中添加了I-Blue裂解緩衝(chong) 液,然後添加了PM2緩衝(chong) 液。加入PM2緩衝(chong) 液後,在混合過程中,樣品將*變成藍色時,樣品將開始變成藍色。無色區域或棕色團塊表明裂解不*,應繼續混合直至樣品*變藍。在中和步驟中,添加PM3緩衝(chong) 液,劇烈搖動試管將開始使樣品變回中性色。一旦樣品*無色,中和就完成了。現在可以添加PER緩衝(chong) 液以去除內(nei) 毒素。現在可以完成純化質粒DNA的結合,洗滌和洗脫。
由於(yu) 分離柱的高效率,整個(ge) 過程無需超速離心機,HPLC或其他有毒試劑,即可在80分鍾內(nei) 完成。純化的質粒DNA適用於(yu) 轉染,測序反應,酶連接,PCR,體(ti) 外轉錄,顯微注射,限製性內(nei) 切酶切和基因槍。
通過從(cong) 50 ml過夜培養(yang) 的E.coli(DH5α)中分離質粒DNA,逐批測試了無內(nei) 毒素質粒提取試劑盒的質量。大腸杆菌(DH5α)培養(yang) 物,含有pBluescript(A600> 2U / ml)。經過純化過程,產(chan) 量超過250 µg,A260 / A280比在1.8-2.0之間。純化的質粒(1 µg)用於(yu) EcoRI消化,並通過電泳進行分析。
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